郭俊廷 高濃度胺基酸下氨之定量方法的建立 |
水中氨的含量是評估環境生態的一大指標,因此精確的量測氨是極為重要的。現今已有許多測量氨的方法,但卻很容易受到水中的基質干擾,特別是胺基酸的干擾更是嚴重,因此我們需要開發準確且能避免干擾的分析方法。 本實驗採用螢光衍生方法測量氨濃度,利用鄰苯二甲醛(o-phthaldialdehyde)搭配亞硫酸鈉(Na2SO3)在鹼性環境中會和氨形成螢光衍生物,且在波長364 nm激發光下會放出波長425 nm發射光,由發射光的量測即可定量水體中的氨含量;在OPA標準液與氨樣品1:1混合的情況下,以10 mM OPA 、0.32 mM Na2SO3、0.32 M硼酸緩衝液 (以上濃度在與氨標準品混合後即稀釋一倍) ,pH=10,衍生溫度60℃,持續衡溫150秒,再於室溫靜置5分鐘,可得最佳的衍生效果,在純水中可得偵測極限(MDL)0.035 μM。 相對於高鹽度基質影響不大,胺基酸仍有嚴重的干擾的情況下,本實驗室搭配高效能液相層析儀及『後衍生器』(post- derivalizator)進行胺基酸與氨的分離與分析;在高濃度胺基酸基質系統下,以陽離子交換管柱進行胺基酸與氨之分離,再以『後衍生螢光法』偵測氨,方能排除胺基酸的干擾。進一步經由實驗結果發現,在含有高濃度胺基酸、銅離子、氯化鈉、磷酸根離子的模擬海水樣品,氨檢量線仍有非常好的線性關係(0.1~5μM),MDL為0.071 μM。
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